à propos de la Ligase:
une ligase est une enzyme qui peut former une nouvelle liaison chimique pour catalyser la fusion de deux grosses molécules par une hydrolyse d’accompagnement d’un petit groupe chimique pendentif. Les Ligases utilisent L’ATP pour former les liaisons et sont utilisées dans le clonage d’ADN recombinant, joignant deux fragments complémentaires d’acide nucléique.
fonction de la Ligase
Les enzymes de L’ADN ligase portent le Numéro EC 6.5.1.1 (numéro CAS 9015-85-4) et sont utilisées pour la jonction de deux brins D’ADN en réparant les ruptures à un seul brin pour catalyser les liaisons phosphodiester., La relation se produit entre l’extrémité 5’ phosphate du nucléotide donneur et les extrémités 3 ‘ hydroxyle du nucléotide accepteur.
le processus en quatre étapes, qui nécessite AMP, implique: la réorganisation de l’activité dans des segments D’ADN ou des fragments D’Okazaki, l’adényltation d’un résidu de lysine au centre actif de l’enzyme pour libérer le pyrophosphate, le transfert de AMP à l’extrémité 5’ phosphate du nucléotide donneur pour former une extrémité pyrophosphate, la formation de la liaison phosphodiester entre le nucléotide donneur et l’hydroxyle 3′ de l’accepteur.,
interactions Ligase
codée par le gène lig, L’ADN ligase d’E. coli gagne de l’énergie en clivant le nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) pour générer une liaison phosphodiester, mais ne peut pas joindre L’ARN à L’ADN. Les concentrés D’ADN polymérase peuvent être utilisés pour augmenter l’activité de L’ADN ligase D’E. coli, mais les concentrés doivent être plus petits que les fragments à ligaturer.
Le virus Escherichia T4 est principalement utilisé dans la recherche en laboratoire, et peut être ligaturé aux extrémités cohésives ou émoussées des oligonucléotides en plus des hybrides ARN et ARN-ADN., Cependant, il ne rejoint pas l’acide nucléique simple brin ou n’utilise pas de NAD. T4 repose sur un cofacteur ATP et a une température optimale de 16 °C.
mécanisme de la Ligase
l’enzyme thermostable est dérivée de la bactérie thermophile et s’active à des températures beaucoup plus élevées que les autres ADN ligases, soulignées par des taux de demi-vie de plus de 1 heure à 95 °C et 48 heures à 65 °C. Elle permet une grande rigidité d’hybridation et une spécificité de ligature, montrant une activité pendant 500 cycles thermiques.