le comptage cellulaire fait partie intégrante de la détermination des concentrations cellulaires pour le placage en culture, de la détermination de la viabilité cellulaire et de l’évaluation des résultats des procédures d’isolement cellulaire. Il est recommandé d’effectuer un comptage cellulaire initial avant l’isolement cellulaire; ce nombre peut ensuite être comparé au nombre de cellules après l’isolement cellulaire pour calculer la récupération cellulaire., De plus, des dénombrements de cellules viables doivent être effectués lorsqu’une diminution de la viabilité cellulaire peut être attendue, par exemple, lorsque l’on travaille avec des cellules cryoconservées ou des cellules manipulées ex vivo.
le comptage cellulaire peut être effectué en utilisant du bleu de Trypan ou de l’acide acétique à 3% avec du bleu de méthylène. Lors de l’exécution d’un comptage cellulaire nucléé total, 3% D’acide acétique avec du bleu de méthylène est recommandé. L’acide acétique lyse les membranes cellulaires et le bleu de méthylène tache les noyaux exposés. Parce que les globules rouges matures manquent de noyaux, ils sont exclus lors du comptage., Alternativement, le bleu de Trypan est recommandé pour compter les cellules de mammifères viables. Le bleu de Trypan pénètre dans la membrane cellulaire, il pénètre ainsi dans le cytoplasme des cellules dont les membranes sont compromises (cellules mortes) pour les colorer en bleu. Les cellules vivantes restent intactes et peuvent être distinguées des cellules mortes par leur capacité à exclure le colorant bleu. Dans ce cas, on compterait les cellules viables intactes.
ce protocole décrit comment effectuer des dénombrements de cellules nucléées totales avec 3% D’acide acétique avec du bleu de méthylène, et comment effectuer des dénombrements de cellules viables par exclusion de colorant bleu Trypan., Des ressources et des modèles de comptage de cellules supplémentaires pour vous aider à rationaliser vos tests sont également disponibles.