cellräkning är en integrerad del av bestämning av cellkoncentrationer för plätering i kultur, bestämning av cellviabilitet och bedömning av resultaten av cellisoleringsförfaranden. Det rekommenderas att utföra ett initialt celltal före cellisolering; detta nummer kan sedan jämföras med cellantalet efter cellisolering för att beräkna cellåtervinning., Dessutom bör viabla cellantal utföras när en minskning av cellviabiliteten kan förväntas, till exempel när man arbetar med kryopreserverade celler eller celler manipulerade ex vivo.
cellräkning kan utföras med Trypan blå eller 3% ättiksyra med metylenblått. Vid utförande av ett totalt nukleerat celltal rekommenderas 3% ättiksyra med metylenblått. Ättiksyra lyserar cellmembranen, och metylenblått fläckar de exponerade kärnorna. Eftersom mogna röda blodkroppar saknar kärnor, utesluts de vid räkning., Alternativt rekommenderas Trypan Blue för att räkna livskraftiga däggdjursceller. Trypan blå tränger in i cellmembranet, så det går in i cytoplasman hos celler med komprometterade membran (döda celler) för att fläcka dem blå. De levande cellerna förblir intakta och kan särskiljas från döda celler genom deras förmåga att utesluta det blå färgämnet. I detta fall skulle man räkna de intakta livskraftiga cellerna.
Detta protokoll beskriver hur man utför totala nukleerade celltal med 3% ättiksyra med metylenblått och hur man utför viabla celltal med trypanblått färgämnesuteslutning., Additionella cellräkning resurser och mallar för att effektivisera dina analyser är också tillgängliga.