Despre Ligase:
Un ligase este o enzimă care poate forma o nouă legătură chimică a cataliza fuziunea a două molecule mari printr-o însoțire de hidroliză de un pandantiv mic grup chimic. Ligazele folosesc ATP pentru a forma legăturile și se utilizează în clonarea ADN-ului recombinant, care unește două fragmente complementare de acid nucleic.
Ligase Funcție
ADN-ul ligase enzime transporta număr CE 6.5.1.1 (număr CAS 9015-85-4) și sunt folosite pentru unirea a două catene de ADN prin repararea single-strand pauze pentru a cataliza phosphodiester obligațiuni., Relația are loc între capătul fosfat 5′ al nucleotidei donoare și capetele hidroxil 3 ‘ ale nucleotidului acceptor.
proces in patru etape, care necesită AMP, implică: reorganizarea activității în segmente de ADN sau fragmente Okazaki, adenyltation de reziduuri de lizină a centrului activ al enzimei pentru a elibera pirofosfat, transfer de AMP a donatorului de nucleotide cu 5′ fosfatul end pentru a forma un pirofosfat final, formarea de legături phosphodiester între donator de nucleotide și 3′ hidroxil a acceptor.,
Ligase Interacțiuni
Codificate de către lig gene, E. coli ADN-ul ligase câștiguri de energie prin despicat nicotinamid-adenin-dinucleotid (NAD) pentru a genera o legătură de phosphodiester, dar nu poate adera la ARN la ADN. ADN polimeraza concentrate pot fi folosite pentru a spori activitatea de E. coli ADN-ul ligase dar concentrate trebuie să fie mai mică decât fragmente pentru a fi bandajat.
virusul Escherichia T4 este utilizat în principal în cercetarea de laborator și poate fi legat fie de capetele coezive, fie de cele contondente ale oligonucleotidelor, în plus față de hibrizii ARN și ARN-ADN., Cu toate acestea, nu se alătură acidului nucleic monocatenar sau nu utilizează NAD. T4 se bazează pe o ATP cofactor și are o temperatură optimă de 16 °C.
Ligase Mecanism
enzime termostabile este derivat din bacterii termofile și activează în prezent temperaturi mai mari decât alte ADN-ligazele, subliniat de înjumătățire a ratelor de peste 1 oră la 95 °C și 48 de ore la 65 °C. Aceasta permite de înaltă hibridizare rigurozitatea și ligatura specificitate, arată activizat pentru 500 de cicluri termice.