Om Ligase:
En ligase er et enzym som kan danne en ny kjemisk binding til catalyse den festes med to store molekyler gjennom en medfølgende hydrolyse av en liten anheng kjemiske gruppe. Ligases bruke ATP å danne obligasjoner, og er brukt i rekombinant DNA-kloning, delta i to komplementære fragmenter av nukleinsyre.
Ligase Funksjon
DNA ligase enzymer bære EC nummer 6.5.1.1 (CAS-nummer 9015-85-4) og brukes for skjøting av to DNA-tråder ved å reparere single-strand pauser for å catalyse phosphodiester obligasjoner., Det forholdet som oppstår mellom 5′ – fosfat slutten av donor nukleotid-og 3′ – hydroksyl endene av akseptor nukleotid.
fire-trinns prosess, som krever AMP, som innebærer: omorganisering av aktivitet i DNA-segmenter eller Okazaki-fragmenter, adenyltation av en lysin rester til aktiv sentrum av enzymet å slippe pyrophosphate, overføring av FORSTERKEREN til giver nukleotid er 5′ – fosfat slutten for å danne en pyrophosphate slutten, dannelsen av phosphodiester bånd mellom donor-nukleotid-og 3′ – hydroksyl av godkjenner.,
Ligase Vekselsvirkningene
Kodet av lig genet, E. coli DNA ligase får energi ved å spalte nikotinamid adenine dinucleotide (NAD) for å generere en phosphodiester bond, men kan ikke bli med RNA til DNA. DNA-polymerase konsentrater kan brukes til å øke aktiviteten av E. coli DNA ligase men konsentrerer må være mindre enn den biter for å være ligated.
Escherichia virus T4 er først og fremst brukt i lab forskning, og kan være ligated å enten sammenhengende eller butte endene av oligonukleotider i tillegg til både RNA og RNA-DNA-hybrider., Imidlertid, er det ikke bli enkelt-strandet nukleinsyre eller bruk NAD. T4 er avhengig av en ATP kofaktor og har en optimal temperatur på 16 °C.
Ligase Mekanisme
thermostable enzym er avledet fra thermophilic bakterie og aktiverer på langt høyere temperaturer enn andre DNA ligases, understreket av half-life priser på over 1 time ved 95 °C og 48 timer på 65 °C. Det gir høy hybridisering stringency og ligation spesifisitet, viser activeness for 500 termisk sykluser.