Sobre Ligase:
Uma ligase é uma enzima que pode formar uma nova ligação química para catalisar a fusão de duas grandes moléculas, através de um acompanhamento da hidrólise de um pequeno pingente grupo químico. Ligases usam ATP para formar as ligações, e é usado na clonagem de DNA recombinante, unindo dois fragmentos complementares de ácido nucleico.
unção da Ligase
As enzimas da ligase do ADN carregam o número ce 6.5.1.1 (número CAS 9015-85-4) e são utilizadas para a junção de duas cadeias de ADN através da reparação de quebras de uma cadeia única para catalisar ligações de fosfodiester., A relação ocorre entre a extremidade 5′ fosfato do nucleótido dador e as extremidades 3′ hidroxil do nucleótido aceitador.
O processo de quatro etapas, que requer AMP, envolve: a reorganização da actividade em segmentos de DNA ou fragmentos de Okazaki, adenyltation de um resíduo de lisina para o centro ativo da enzima para liberar o pirofosfato, de transferência do AMPLIFICADOR para o doador de nucleotídeos 5′ de fosfato para formar um pirofosfato de final, a formação da ligação fosfodiéster entre o doador de nucleotídeos e a 3′ da hidroxila do aceitante.,interacções da Ligase codificadas pelo gene ligase, a ligase ADN de E. coli ganha energia através da clivagem do dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD) para gerar uma ligação fosfodiester, mas não pode ligar o ARN ao ADN. Os concentrados de ADN polimerase podem ser utilizados para aumentar a actividade da ligase de ADN de E. coli, mas os concentrados devem ser mais pequenos do que os fragmentos a ligar.o vírus Escherichia T4 é usado principalmente na pesquisa de laboratório, e pode ser ligado às extremidades coesas ou contundentes de oligonucleótidos, além de ambos os híbridos RNA e RNA-DNA., No entanto, não se junta a ácido nucleico de cadeia simples ou usa NAD. T4, depende de um ATP cofactor e tem um ideal de temperatura de 16 °C.
Ligase Mecanismo de
A enzima termoestável é derivada da thermophilic bactéria e ativa em muito maiores temperaturas do que os outros DNA ligases, sublinhada por meia-vida de taxas de mais de 1 hora a 95 °C e em 48 horas a 65 °C. permite alta de hibridização com o rigor e a ligadura especificidade, mostrando o envolvimento de 500 ciclos térmicos.