CASE REPORT
Un uomo di 56 anni con diabete mellito è stato ricoverato nel reparto di chirurgia a causa di un’infezione al piede. Dopo lo sbrigliamento di un ascesso, lo scarico è stato inviato al laboratorio di microbiologia per la coltura.
L’esame microscopico diretto del materiale purulento ha mostrato leucociti e cocchi gram-positivi. La coltura su agar di sangue di pecora 5% dopo l’incubazione notturna ha prodotto colonie lisce, sollevate, scintillanti, grigio-bianche, beta-emolitiche., Lo striscio gram-macchiato delle colonie ha rivelato cocchi gram positivi in grappoli. Il test di catalasi eseguito con 3% H2 O2 su un vetrino è stato ripetutamente negativo. Nonostante la negatività della catalasi, la produzione di coagulasi è stata testata con un test di coagulasi in provetta e il test della DNAasi è stato eseguito su mezzo DNAasi e sono risultati positivi, identificando l’organismo come S. aureus. Il ceppo attuale differisce da Staphylococcus saccharolyticus e Staphylococcus aureus subsp. anaerobio per la sua produzione di fattore di aggregazione, produzione di acido da trealosio, mannosio e lattosio e riduzione dei nitrati (4).,
L’identificazione dell’isolato come S. aureus subsp. aureus è stato confermato dall’amplificazione PCR dei geni nuc e fem (5). Per identificare il meccanismo responsabile della mancanza di attività della catalasi, la sequenza nucleotidica del gene S. aureus catalasi nel ceppo catalasi-negativo è stata amplificata mediante PCR utilizzando una serie di primer, Cat1 5’ TATAAATTGTGGAGGGATGAT3’ e Cat 2 5 ‘TCATAAACTGCTCAACTACGC3’ (3).
Il DNA totale di S. aureus è stato estratto con il metodo del bromuro di cetil trimetil ammonio dopo pretrattamento di batteri con lisostafina (1 mg ml−1) per 1 ora a 37°C in Tris/EDTA / saccarosio., La PCR è stata eseguita in un volume di 50 µl contenente 50 ng di DNA genomico con reagenti e protocolli forniti dal produttore (Roche, Germania). Le condizioni di reazione del termo ciclatore erano 1 min. a 94°C, 1 min. a 52 ° C e 1 o 1,5 min a 72 ° C per 30 cicli. Tutte le amplificazioni PCR includevano denaturazione preliminare a 94°C per 10 min e incubazione finale a 72°C per 10 min. I prodotti PCR amplificati sono stati analizzati mediante elettroforesi su gel di agarosio all ‘ 1%. Il risultato della PCR ha confermato che questo isolato è un ceppo S. aureus catalasi-negativo.,
La suscettibilità dell’isolato agli antibiotici è stata determinata utilizzando il metodo di diffusione del disco secondo le linee guida del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) (6). Il ceppo è risultato sensibile all’imipenem, al cloramfenicolo, all’amoxicillina, alla vancomicina e resistente all’oxacillina, alla penicillina, al ceftriaxone, all’eritromicina, alla clindamicina e all’amikacina.
Gli isolati di S. aureus catalasi-negativi sono estremamente rari. Sono stati riportati solo alcuni ceppi di S. aureus catalasi-negativi (4, 7). La catalasi è un enzima proteico eme che decompone il perossido di idrogeno prodotto dai fagociti., La produzione di catalasi non sembra essere essenziale per la crescita di S. aureus in vitro e in vivo (4, 8) ma è un meccanismo di difesa contro la distruzione del microrganismo nelle cellule fagocitiche (2). D’altra parte, esiste una buona correlazione tra l’attività della catalasi stafilococcica e la sua letalità nel topo (8). Questo può spiegare la bassa frequenza di infezione causata da ceppi S. aureus catalasi negativi.
La rilevanza clinica dei ceppi di S. aureus catalasi-negativi richiede ulteriori indagini. Nei rapporti precedenti, il catalasi-negativo S., i ceppi di aureus sono stati isolati da campioni di sangue, cateteri, campioni di secrezione bronchiale, ulcere e altre ferite associate a infezioni o endemismi nosocomiali (9-11). Tuttavia, la vera incidenza di S. aureus catalasi-negativo è sconosciuta perché molti laboratori diagnostici non eseguono il test della catalasi ma utilizzano la colorazione di gram, la morfologia coloniale, il test della coagulasi e altri test biochimici per l’identificazione di S. aureus., In conclusione, i medici e i microbiologi devono essere incoraggiati a identificare e segnalare questi ceppi atipici e le infezioni ad essi associate, al fine di stabilire il loro ruolo nella patogenesi.