Il conteggio delle cellule è parte integrante della determinazione delle concentrazioni cellulari per la placcatura in coltura, la determinazione della vitalità cellulare e la valutazione dei risultati delle procedure di isolamento cellulare. Si consiglia di eseguire un conteggio iniziale delle cellule prima dell’isolamento delle cellule; questo numero può quindi essere confrontato con il conteggio delle cellule dopo l’isolamento delle cellule per calcolare il recupero delle cellule., Inoltre, la conta delle cellule vitali deve essere eseguita quando ci si può aspettare una diminuzione della vitalità cellulare, ad esempio quando si lavora con cellule crioconservate o cellule manipolate ex vivo.
Il conteggio delle cellule può essere eseguito utilizzando tripano blu o acido acetico al 3% con blu di metilene. Quando si esegue un conteggio totale delle cellule nucleate, si raccomanda il 3% di acido acetico con blu di metilene. L’acido acetico lisia le membrane cellulari e il blu di metilene macchia i nuclei esposti. Poiché i globuli rossi maturi mancano di nuclei, sono esclusi quando si conta., In alternativa, Trypan Blue è raccomandato per il conteggio delle cellule di mammifero vitali. Il Trypan Blue penetra nella membrana cellulare, quindi entra nel citoplasma delle cellule con membrane compromesse (cellule morte) per macchiarle di blu. Le cellule vive rimangono intatte e possono essere distinte dalle cellule morte per la loro capacità di escludere il colorante blu. In questo caso si contano le cellule vitali intatte.
Questo protocollo descrive come eseguire il conteggio totale delle cellule nucleate con acido acetico al 3% con blu di metilene e come eseguire il conteggio delle cellule vitali mediante l’esclusione del colorante blu tripano., Sono inoltre disponibili risorse e modelli di conteggio delle cellule aggiuntivi per semplificare le analisi.