A Ligázról:
a ligáz olyan enzim, amely új kémiai kötést képezhet két nagy molekula összeolvasztására egy kis medál kémiai csoport kísérő hidrolízisén keresztül. A ligázok ATP-t használnak a kötések kialakításához, és rekombináns DNS klónozáshoz használják, összekötve a nukleinsav két kiegészítő fragmentumát.
ligáz funkció
A DNS-ligáz enzimek hordozzák a 6.5.1.1 EK-számot (CAS-szám 9015-85-4), és két DNS-szál összekapcsolására használják az egyszálú szünetek katalizikus foszfodiészter-kötésekre történő javításával., A kapcsolat a donor nukleotid 5′ foszfát vége és az akceptor nukleotid 3′ hidroxil végei között alakul ki.
A négy lépésből álló folyamat, amely előírja, ERŐSÍTŐ, magában foglalja: az átszervezés, a tevékenység DNS szegmensek vagy Okazaki fragmentumok, adenyltation a lizin maradékot az aktív központ az enzim, hogy kiadja a pyrophosphate, átadása AMP, hogy a donor nukleotid-5′ – foszfát végén alkotnak egy pyrophosphate végén megalakult a phosphodiester kötelék a donor nukleotid, illetve a 3′ hidroxil az elfogadó.,
ligáz kölcsönhatások
A lig gén által kódolt E. coli DNS-ligáz energiát nyer a nikotinamid adenin-dinukleotid (NAD) lebontásával, hogy foszfodiészter kötést hozzon létre, de nem tud csatlakozni az RNS-hez a DNS-hez. A DNS-polimeráz koncentrátumok felhasználhatók az E. coli DNS-ligáz aktivitásának fokozására, de a koncentrátumoknak kisebbnek kell lenniük, mint a ligálandó fragmentumok.
az Escherichia vírus T4-et elsősorban laboratóriumi kutatásokban használják, és mind az RNS, mind az RNS-DNS hibridek mellett az oligonukleotidok kohéziós vagy tompa végeihez is köthetők., Azonban nem csatlakozik az egyszálú nukleinsavhoz, vagy nem használja a NAD-t. A T4 ATP-kofaktorra támaszkodik, optimális hőmérséklete 16 °C.
Ligázmechanizmus
a termostabil enzim a termofil baktériumból származik, és sokkal nagyobb hőmérsékleten aktiválódik, mint más DNS-ligázok, amelyeket 95 °C-on több mint 1 óra felezési idő mutat, 65 °C-on pedig 48 óra.