Tietoja Ligase:
ligase on entsyymi, joka voi muodostaa uusia kemiallisia bond vauhdittaa fuusioimalla kaksi suurta molekyylien kautta mukana hydrolyysi pieni riipus kemiallinen ryhmä. Ligaasit käyttävät sidosten muodostamiseen ATP: tä, ja sitä käytetään yhdistelmä-DNA-kloonauksessa, johon liittyy kaksi toisiaan täydentävää nukleiinihapon fragmenttia.
Ligase-Toiminto
DNA ligase entsyymejä kantaa EY-numero 6.5.1.1 (CAS-numero 9015-85-4) ja käytetään yhdistää kaksi DNA-säikeet korjaamalla yhden säikeen katkoksia vauhdittamaan phosphodiester joukkovelkakirjoja., Suhde tapahtuu välillä 5′ – fosfaatti lopussa luovuttajan nukleotidi-ja 3′ hydroksyyli päättyy tunnustaja nukleotidin.
neljä-askeleelta prosessi, joka vaatii AMP, liittyy: uudelleenorganisointi toiminnan DNA-segmentit tai Okazaki palasia, adenyltation on lysiini jäämiä aktiivinen keskus entsyymi vapauttaa pyrofosfaatti, siirto AMP luovuttajan nukleotidin 5′ – fosfaatti end muodostaa pyrofosfaatin lopussa, muodostumista phosphodiester sidos luovuttajan nukleotidi-ja 3′ – hydroksyyli-ja tunnustaja.,
Ligase Vuorovaikutus
Koodattu lig geeni, E. coli DNA ligase voitot energiaa pilkkomaan nikotiiniamidiadeniinidinukleotidi (NAD) tuottaa phosphodiester sidos, mutta ei voi liittyä RNA-DNA. DNA-polymeraasi tiivisteet voidaan lisätä toiminnan E. coli DNA ligase mutta tiivisteet on oltava pienempi kuin sirpaleiden olevan sidotut.
Escherichia virus T4 käytetään pääasiassa laboratorio tutkimus, ja voi olla liitettiin joko yhtenäinen tai tylpät päät oligonukleotidit lisäksi sekä RNA ja RNA-DNA-hybridit., Se ei kuitenkaan liity yksijuosteiseen nukleiinihappoon tai käytä NAD: ää. T4 perustuu ATP: n kofaktorina ja on optimaalinen lämpötila 16 °C.
Ligase Mekanismi
termostabiili entsyymi on johdettu termofiilinen bakteeri ja aktivoi huomattavasti suurempia lämpötiloja kuin muut DNA-ligaasit, korosti puoliintumisaika hinnat yli 1 tunti lämpötilassa 95 °C ja 48 tunnin ajan 65 °C. Se mahdollistaa korkea hybridisaatio tiukkuuden ja ligaatio spesifisyys, osoittaa aktiivisuus 500 lämpötilamuutoksissa.