la prueba de oxidasa se utiliza para identificar bacterias que producen citocromo C oxidasa, una enzima de la cadena de transporte de electrones bacterianos. Cuando está presente, la citocromo C oxidasa oxida el reactivo (tetrametil-p-fenilendiamina) a (indofenoles) producto final de color púrpura. Cuando la enzima no está presente, el reactivo permanece reducido y es incoloro.,
Todas las bacterias que son oxidasa-positivos son los aeróbicos, y pueden utilizar el oxígeno como aceptor terminal de electrones en la respiración. Esto no significa que sean aerobios estrictos., Las bacterias que son oxidasas negativas pueden ser anaeróbicas, aeróbicas o facultativas; el resultado oxidasa negativa solo significa que estos organismos no tienen el citocromo C oxidasa que oxida el reactivo de prueba. Pueden respirar usando otras oxidasas en el transporte de electrones.
propósito de la prueba de oxidasa
la prueba de oxidasa es más útil en la detección de colonias sospechosas de ser una de las Enterobacteriaceae (todas negativas) y en la identificación de colonias sospechosas de pertenecer a otros géneros como Aeromonas, Pseudomonas, Neisseria, Campylobacter y Pasteurella (positivas).,
requisitos de prueba para la prueba de oxidasa: papel de filtro Húmedo con el sustrato (1% de dihidrocloruro de tetrametil-p-fenilendiamina), o disco de papel preparado comercialmente, alambre de madera o alambre de platino.,
resultados esperados de la prueba de oxidasa
- positivo: desarrollo de color púrpura oscuro (indofenoles) en 10 segundos
- negativo: ausencia de color
Prueba de oxidasa modificada (Microdasa): principio, procedimiento y usos
control de calidad de la prueba de oxidasa
las especies bacterianas que muestran reacciones positivas y negativas deben ejecutarse como controles a intervalos frecuentes. Se sugiere lo siguiente:
A. control positivo: Pseudomonas aeruginosa
B.,con lazo de madera o platino y frotis en el papel de filtro
precaución a tomar mientras se realiza la prueba de oxidasa:
- No use alambres de aleación con base de níquel que contengan cromo y hierro (nicrom) para recoger la colonia y hacer frotis ya que esto puede dar resultados falsos positivos
- interprete los resultados dentro de 10 segundos, el tiempo es crítico
Nota:
la prueba de oxidasa debe realizarse a partir de agar de sangre de oveja al 5% u otro medio sin azúcar fermentable., La fermentación de los carbohidratos da lugar a la acidificación del medio (por ejemplo, lactosa en Agar MacConkey o sacarosa en TCBS), y una prueba de oxidasa falsa negativa puede resultar si el pH circundante es inferior a 5.1. Se requiere subinoculación en Agar nutriente antes de que se pueda realizar la prueba de oxidasa.
durante la identificación del aislado sospechoso de Vibrio cholerae, no es posible realizar una prueba de oxidasa directamente de un cultivo de TCBS porque el ácido producido por las colonias de fermentación de sacarosa inhibirá la reacción de oxidasa.,
resultados de la prueba de oxidasa
los géneros bacterianos caracterizados como oxidasa positiva incluyen Neisseria y Pseudomonas etc. Los géneros de la familia Enterobacteriaceae se caracterizan como oxidasa negativa.
el nombre de las bacterias oxidasa positivas son: Mneomoics para organismos oxidasa positivos – PVNCH (es solo un acrónimo inspirado en el famoso mneomonic para organismos ureasa positivos-PUNCH)
- p: Pseudomonas spp
- V: Vibrio cholerae
- N: Neisseria spp
- C: Campylobacter spp
- H: Helicobacter spp/ Haemophilus spp.,
- Aeromonas spp
- Alcaligens