acerca de Ligase:
una ligasa es una enzima que puede formar un nuevo enlace químico para catalizar la fusión de dos moléculas grandes a través de una hidrólisis acompañante de un pequeño grupo químico colgante. Las ligasas utilizan ATP para formar los enlaces, y se utiliza en la clonación de ADN recombinante, uniendo dos fragmentos complementarios de ácido nucleico.
función de la ligasa
Las enzimas de la ADN ligasa llevan el número CE 6.5.1.1 (Número CAS 9015-85-4) y se utilizan para la Unión de dos hebras de ADN mediante la reparación de roturas de una sola hebra para catalizar enlaces fosfodiéster., La relación ocurre entre el extremo 5′ fosfato del nucleótido donante y los extremos 3′ hidroxilo del nucleótido aceptor.el proceso de cuatro pasos, que requiere AMP, implica: la reorganización de la actividad en segmentos de ADN o fragmentos de Okazaki, adeniltación de un residuo de lisina al centro activo de la enzima para liberar el pirofosfato, transferencia de AMP al extremo 5′ fosfato del nucleótido donante para formar un extremo pirofosfato, formación del enlace fosfodiéster entre el nucleótido donante y el 3′ hidroxilo del aceptor.,
interacciones con la ligasa codificada por el gen lig, la ligasa de ADN de E. coli gana energía al escindir el dinucleótido nicotinamida adenina (NAD) para generar un enlace fosfodiéster, pero no puede unir el ARN al ADN. Los concentrados de la polimerasa de la DNA se pueden utilizar para aumentar la actividad de la ligasa de la DNA de E. coli pero los concentrados deben ser más pequeños que los fragmentos que se ligarán.
el virus T4 de Escherichia se utiliza principalmente en la investigación del laboratorio, y se puede ligar a los extremos cohesivos o Romos de los oligonucleótidos además de los híbridos del ARN y del ARN-DNA., Sin embargo, no se une al ácido nucleico monocatenario ni utiliza NAD. T4 se basa en un cofactor ATP y tiene una temperatura óptima de 16 °C.
mecanismo de la ligasa
la enzima termoestable se deriva de la bacteria termofílica y se activa a temperaturas mucho mayores que otras ligasas de ADN, subrayadas por tasas de semivida de más de 1 hora a 95 °C y 48 horas a 65 °C. permite una alta rigidez de hibridación y especificidad de ligadura, mostrando actividad para 500 ciclos térmicos.