el conteo celular es una parte integral de la determinación de las concentraciones celulares para el enchapado en cultivo, la determinación de la viabilidad celular y la evaluación de los resultados de los procedimientos de aislamiento celular. Se recomienda realizar un recuento inicial de células antes del aislamiento celular; este número se puede comparar con el recuento de células después del aislamiento celular para calcular la recuperación celular., Además, se deben realizar recuentos de células viables cuando se puede esperar una disminución en la viabilidad celular, por ejemplo, cuando se trabaja con células criopreservadas o células manipuladas ex vivo.
el conteo celular se puede realizar usando azul de Tripano o ácido acético al 3% con azul de metileno. Cuando se realiza un recuento total de células nucleadas, se recomienda ácido acético al 3% con azul de metileno. El ácido acético Lisa las membranas celulares, y el azul de metileno tiñe los núcleos expuestos. Debido a que los glóbulos rojos maduros carecen de núcleos, se excluyen al contar., Alternativamente, Trypan Blue se recomienda para contar células de mamíferos viables. Trypan Blue penetra en la membrana celular, por lo que entra en el citoplasma de las células con membranas comprometidas (células muertas) para teñirlas de azul. Las células vivas permanecen intactas y se pueden distinguir de las células muertas por su capacidad para excluir el tinte azul. En este caso se contarían las células viables intactas.
este protocolo describe cómo realizar recuentos de células nucleadas totales con ácido acético al 3% con azul de metileno, y cómo realizar recuentos de células viables mediante exclusión de tinte azul de Tripano., También hay disponibles recursos y plantillas adicionales de conteo de células para ayudar a optimizar sus ensayos.