Die Zellzählung ist ein wesentlicher Bestandteil der Bestimmung der Zellkonzentrationen für Zellen in Kultur, der Bestimmung der Zelllebensfähigkeit und der Bewertung der Ergebnisse von Zellisolierungsverfahren. Es wird empfohlen, eine anfängliche Zellzahl vor der Zellisolierung durchzuführen; Diese Zahl kann dann mit der Zellzahl nach der Zellisolierung verglichen werden, um die Zellwiederherstellung zu berechnen., Darüber hinaus sollten lebensfähige Zellzahlen durchgeführt werden, wenn eine Abnahme der Zelllebensfähigkeit zu erwarten ist, beispielsweise bei der Arbeit mit kryokonservierten Zellen oder Zellen, die ex vivo manipuliert wurden.
Zellzählung kann mit Trypan Blau oder 3% Essigsäure mit Methylenblau durchgeführt werden. Bei einer Gesamtkernzellzahl wird 3% Essigsäure mit Methylenblau empfohlen. Essigsäure lysiert die Zellmembranen und das Methylenblau färbt die freiliegenden Kerne. Da reife rote Blutkörperchen keine Kerne haben, sind sie beim Zählen ausgeschlossen., Alternativ wird Trypan Blue zum Zählen lebensfähiger Säugetierzellen empfohlen. Trypan Blue dringt in die Zellmembran ein und gelangt so in das Zytoplasma von Zellen mit kompromittierten Membranen (tote Zellen), um sie blau zu färben. Die lebenden Zellen bleiben intakt und können von toten Zellen durch ihre Fähigkeit, den blauen Farbstoff auszuschließen, unterschieden werden. In diesem Fall würde man die intakten lebensfähigen Zellen zählen.
Dieses Protokoll beschreibt, wie insgesamt nukleinerte Zellzahlen mit 3% Essigsäure mit Methylenblau durchzuführen, und wie lebensfähige Zellzahlen durch Trypan blauen Farbstoff Ausschluss durchzuführen., Zusätzliche Zellenzählressourcen und Vorlagen zur Optimierung Ihrer Assays sind ebenfalls verfügbar.