celletælling er en integreret del af bestemmelsen af cellekoncentrationer til plating i kultur, bestemmelse af cellelevedygtighed og vurdering af resultaterne af celleisoleringsprocedurer. Det anbefales at udføre et indledende celletal før celleisolering; dette tal kan derefter sammenlignes med celletallet efter celleisolering for at beregne cellegenvinding., Derudover skal levedygtige celletællinger udføres, når der kan forventes et fald i cellelevedygtighed, for eksempel ved arbejde med kryokonserverede celler eller celler manipuleret e.vivo.
celletælling kan udføres ved anvendelse af Trypanblåt eller 3% eddikesyre med methylenblåt. Ved udførelse af et totalt nucleeret celletal anbefales 3% eddikesyre med methylenblåt. Eddikesyre lyser de cellulære membraner, og methylenblåt pletter de udsatte kerner. Fordi modne røde blodlegemer mangler kerner, udelukkes de, når de tælles., Alternativt anbefales Trypan Blue til at tælle levedygtige pattedyrsceller. Trypanblå trænger ind i cellemembranen, således kommer den ind i cytoplasmaet af celler med kompromitterede membraner (døde celler) for at plette dem blå. De levende celler forbliver intakte og kan skelnes fra døde celler ved deres evne til at udelukke det blå farvestof. I dette tilfælde ville man tælle de intakte levedygtige celler.
Denne protokol beskriver, hvordan du udfører samlede kerneholdige celletal med 3% Eddikesyre med methylenblåt, og hvordan man udfører levedygtige celletal af Trypan Blue dye udstødelse., Additonal celletælling ressourcer og skabeloner til at hjælpe med at strømline dine analyser er også tilgængelige.