O Ligázy:
ligázy je enzym, který může tvořit nové chemické vazby katalyzují sloučení dvou velkých molekul přes průvodním hydrolýzou malý přívěsek chemické skupiny. Ligázy používají ATP k vytvoření vazeb a používají se při rekombinantním klonování DNA a spojují dva komplementární fragmenty nukleové kyseliny.
Ligázy Funkce
DNA ligázy, enzymy nést číslo ES 6.5.1.1 (číslo CAS 9015-85-4) a používají se pro spojení dvou řetězců DNA opravou single-strand breaks katalyzovat phosphodiester dluhopisů., Vztah nastává mezi 5′ fosfát end dárce nukleotidů a 3′ hydroxylové konce akceptor nukleotidů.
čtyři-proces kroku, který vyžaduje AMP, zahrnuje: reorganizace činnosti v DNA segmenty nebo Okazaki fragmenty, adenyltation z lysin rezidua v aktivním centru enzymu se uvolní pyrofosfát, převod AMP dárce nukleotidů 5′ fosfát konci tvoří pyrofosforečnan end, tvorba phosphodiester pouto mezi dárcem nukleotidů a 3′ hydroxylovou na akceptor.,
Ligázy Interakce
Kódované lig gen, E. coli DNA ligázy získává energii štěpením nikotinamidadenindinukleotid (NAD) generovat phosphodiester bond, ale nemůže připojit RNA do DNA. DNA polymeráza koncentráty mohou být použity ke zvýšení aktivity z E. coli DNA ligázy ale koncentrátů musí být menší než fragmenty být podvázány.
virus Escherichia T4 se primárně používá v laboratorním výzkumu a může být ligován buď na soudržné nebo tupé konce oligonukleotidů kromě hybridů RNA a RNA-DNA., Nepřipojuje se však k jednovláknové nukleové kyselině ani nepoužívá NAD. T4 spoléhá na ATP kofaktor a má optimální teplota 16 °C.
Ligázy Mechanismus
termostabilní enzym pocházející z termofilní bakterie a aktivuje v daleko větší teploty než jiné DNA ligázy, podtržený tím, že half-life sazby o více než 1 hodinu při 95 °C a 48 hodin při teplotě 65 °C. To umožňuje vysokou hybridizace přísnosti a ligace specifičnost, ukazující aktivitu na 500 tepelných cyklů.